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    液相常見6種問題色譜峰解決方法

    時間 : 2022-10-24 14:57:01 閱讀 : 165

    一、拖尾峰

    1. 篩板阻塞:柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞,樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲,使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱,或者更換篩板。

    2. 色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,不能對物質形成保留,使得物質不在固定相上保留而隨流動相流出,但是又還有一點柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

    3. 有污染:即樣品不在同一起跑線起跑,從后面開始跑得到達終點稍晚,表現出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上,以沖洗柱子。

    4. 流動相PH值選擇錯誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態平衡,離子型的陸續向分子型轉化就會表現出拖尾。調節PH值可抑制分子解離,改善拖尾,對于堿性化合物,相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。


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    二、前沿峰

    1. 樣品過載:被保留的樣品在正常出峰時間前陸續出來,形成前沿峰。降低樣品含量。

    2. 樣品溶劑選擇不恰當:當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現前沿峰,例如,在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,而流動相的洗脫力較弱時會出現前沿峰。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。

    3. 色譜柱損壞:色譜柱柱效損失,不能對物質形成保留。更換色譜柱。

    4. 在大峰前有小峰出現,假象前沿峰,即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調整流動相洗脫梯度。


    三、基線漂移

    1. 柱溫波動:即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動,通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱,控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。

    2. 流動相不均勻:流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。使用HPLC級的溶劑,流動相在使用前進行脫氣處理。

    3. 流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

    4. 流動相配比不當或流速變化:更改配比或流速,為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

    5. 樣品中有強保留的物質:以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出一個逐步升高的基線。使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。


    四、出現寬峰

    1. 色譜柱污染或失效,造成塔板數降低:更換同樣類型的色譜柱,如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強溶劑沖洗舊柱子。

    2. 柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大:更換內徑較小的短管路。

    3. 檢測器對反應時間或池體積響應過大:減少響應時間或使用更小的流通池。


    五、基線噪音

    1. 在流動相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰):流動相脫氣,沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

    2. 漏液:檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。

    3. 流動相混合不完全:用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

    4. 溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱):使用柱溫箱,減少溫度差異或加上熱交換器。

    5. 在同一條線上有其他電子設備(偶然噪聲):斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。采用精密級穩壓電源。


    六、分離度不夠

    1.流動相梯度洗脫設置不合理:優化梯度洗脫程序。

    2.流動相污染或變質(引起保留時間變化):重新配置流動相。

    3. 保護柱或分析柱阻塞:去掉保護柱進行分析,如果必要則更換保護柱;如果分析柱阻塞,可進行反沖;如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當的再生程序;如果問題仍然存在,進口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。


    標簽 :
    標題:液相常見6種問題色譜峰解決方法
    網址:http://www.bnhyt.net/a/5211.html
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